实验开始前没有从乳汁中检测出相应细菌，但是实验后含量确增高
攻毒前所有奶牛乳汁中均未检出大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌。
攻毒后，攻毒组乳汁含菌量迅速升高，至第36—48h乳汁含菌量均达到高峰，并于48h后迅速降低，第4天之后所有攻毒组细菌计数几乎无法检出。
两因素析因设计资料的方差分析显示，EHL11组乳汁含菌量显著低于LZ06组和ESH05组，差异显著（P<0.05)，LZ06组和ESH05组组间差异不显著（P>0.05）。
攻毒前乳汁体细胞计数为每毫升20—40万个，乳汁导电率480—540。
攻毒后的情况所示，攻毒后第3天，奶牛乳汁的导电率迅速下降至200—240，提示体细胞数高于每毫升500万个。
第4天导电率开始缓慢回升，至观察期结束大多数奶牛导电率为470—490，部分奶牛导电率恢复攻毒前状态，恢复速度取决于个体差异。
两因素析因设计资料的方差分析显示，菌株间差异不显著（P>0.05）。
目前，对于人医临床上的“耐药菌”和兽医临床上的“奶牛乳房炎”的防治还处于“抗生素为王”的时代，但抗生素滥用，已造成生态灾难，落实减抗计划必须向科学要答案。
未来，免疫预防和生物治疗是控制耐药菌泛滥和奶牛乳房炎高发的关键一招，也为评估耐药菌防控中采用“人病兽防”措施提供一个合适的观察窗口。
乳房炎疫苗不仅能有效预防乳房炎的发生，而且还能提高机体免疫力，此外，还能有效控制滥用药物等问题，是落实减抗计划的关键手段。
为评价疫苗和药品对大肠杆菌奶牛乳房炎的防治效果，第一步就是要建立合理的评价体系，而建立理想的稳定的动物模型是必须首先要突破的技术难题。
理想的奶牛乳房炎动物模型，首先要能够模拟奶牛乳房炎发生发展的真实过程；其次，菌株能够稳定地造成奶牛乳房炎，乳房炎可持续复制；最后，同一菌株建立两个及以上的动物模型，用于疫苗和药品的规模化筛选和确认，在成熟后，可以实现替代，使成本降低、结果可信。
不同来源的菌株致病力大不同，临床型乳房炎的临床表现也千差万别，且奶牛个体差异对疾病发病率和致死率影响很大，因为大肠杆菌作为条件性致病菌，很难在健康宿主中建立可重复的感染性模型，因此建立奶牛乳房炎模型，需要有能稳定致病的大肠杆菌强毒株。
我们对采集自全国各地奶牛场乳房炎临床病例的乳样进行大肠杆菌分离、培养和血清学鉴定，得到不同血清型的候选菌株；通过测定不同菌株对小鼠的LD50和对奶牛的MID筛选出对BALB/c小鼠和健康易感奶牛均具有较强毒力的3株强毒菌株，并命名LZ06（血清型O6）、ESHO5株（血清型O8）、EHL11株（血清型O81）。
在自然环境中，广泛存在的大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌等细菌易通过挤奶工具等直接接触方式进行传播，病原菌通过乳导管进入乳腺造成乳房炎是最常见的感染致病方式，因此我们优选乳导管内注射方式进行接种病原菌模拟实际感染情况并进行建模。
本研究以103CFU剂量乳导管内注射健康易感奶牛，接种后第1天感染组奶牛均出现精神差、食欲不振、体温升高、心率加快呼吸急促等乳房炎的典型临床症状；前期乳汁异常出现颗粒样或糊样，部分奶牛随后出现水样、絮样、血样和脓样乳汁；日产奶量减少超过接种前的40%；乳汁菌计数和体细胞数变化也开始迅速升高（P<0.05），与Rohmeier的研究结果一致。
而与其他研究结果不同的是本实验中菌计数和体细胞数持续升高至接种后第3天，这可能是接种剂量不同或不同品种奶牛对病原菌的易感性不同所致。
奶牛在感染不同菌株后的相同时间内产生了类似的临床症状和病理变化，说明LZ06、ESHO5、EHL11毒力作用明显且稳定，可用于建立奶牛乳房炎模型。
本研究筛选的3株菌株攻毒后相关指标之间无显著差异（P>0.05），提示3个菌株对奶牛的毒力相似。
攻毒后，日产奶量的变化与其他指标相比最为明显，可能是由于乳房周围血管和淋巴结丰富，大量强毒株进入立刻引起强烈的局部免疫反应，炎性细胞和固有免疫细胞被大量趋化至病变部位，强烈的炎症反应导致奶牛泌乳功能迅速降低。
另外，由于强烈的炎症反应，局部血管扩张，内皮细胞间隙增大，有利于细菌入血导致菌血症和毒血症，迅速出现精神食欲差、体温升高、心率加快、呼吸急促等全身症状。
攻毒后第2天，细菌计数迅速达峰，又在第3天里迅速下降至低点，于第4天所有奶牛乳汁细菌完全清除。
与之相对应，日产奶量和乳汁导电值于第3天降至低点并开始缓慢回升，提示随着机体免疫系统对大肠杆菌的清除，局部炎症症状逐渐减轻，细胞和器官功能逐渐恢复，直到观察期结束也未完全恢复至攻毒前水平，可能是局部炎症仍未完全消退，也可能是适应性免疫系统的启动，占用乳房局部的能量供应导致乳房功能恢复延迟。
所有奶牛的临床表现均于攻毒后第7—8天开始恢复，提示此刻入血的细菌和毒素几乎被完全清除。
以上实验结果反映了大肠杆菌作为条件致病菌的典型特征，奶牛乳房炎通常是一个快速发病和能够自愈的疾病，其防治效果评价更需要一个稳定的动物模型。
由于奶牛动物模型用于研发疫苗和药物相对成本较高，前期研究必须有成本低、适合快速筛选的替代动物模型，课题组优选小鼠作为疫苗和药效学评价的实验动物，用同一株细菌建立的致死性大肠杆菌感染小鼠模型。
本研究建立的大肠杆菌奶牛乳房炎感染致病模型，为评价疫苗和药物对不同大肠杆菌致奶牛乳房炎的防治效果提供了物质基础，也为探索奶牛乳房炎的发病机制提供了宝贵的实验资源，对耐药大肠杆菌人用疫苗研发也有参考意义。
本研究用LZ06（血清型O6）菌株建立的奶牛乳房炎模型和小鼠致死模型为评价奶牛乳房炎大肠杆菌基因缺失灭活疫苗（Z9株）的有效性提供了详实的试验数据。
目前灭活疫苗（Z9株）已完成实验室阶段和临床试验阶段的全部研究，进入新兽药注册和产品复核检验阶段，动物模型也为产品上市批检验奠定了物质基础。
本研究筛选了导致奶牛乳房炎的大肠杆菌强毒株，成功建立大肠杆菌奶牛乳房炎感染致病模型，为后续大肠杆菌疫苗和药物的有效性评价提供了数据支持，对耐药菌的防治有一定指导作用。
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